Nuestra tecnología (patente ES2610744) proporciona un sistema que permite identificar, con células vivas, el efecto tanto de agentes químicos como de mutaciones génicas con consecuencias en la reorganización de los genes y potencialmente cancerígenos. Esta identificación se realiza en el microscopio de fluorescencia con células sometidas a las condiciones que se quieran estudiar. El procedimiento permite obtener resultados en muy corto espacio de tiempo.

En la primera versión de éste análisis de recombinación se emplean dos genes modificados, en este caso al fusionarlos con proteína fluorescente verde (GFP), presentes en la levadura Saccharomyces cerevisiae. Dichos genes dan lugar a dos proteínas fluorescentes con diferente localización celular: una de ellas es nucleolar y emite una fluorescencia intensa; la otra emite una fluorescencia más tenue y es citosólica (véase la imagen 1). La recombinación entre los dos genes fusionados a GFP causa cambios en el patrón de fluorescencia celular (nucleolar versus citosólico) por la pérdida de uno de ellos (véase la imagen 2). Su frecuencia puede ser cuantificada.

Esta tecnología no implica grandes infraestructuras y se pueden analizar de un modo rápido las frecuencias de recombinación sin tener que hacer extracciones de ácidos nucleicos ni análisis moleculares. El procedimiento es aplicable a células vegetales y humanas. Estas últimas aplicaciones tienen cabida en medicina y biotecnología.

Otra información de interés:

Publicaciones y difusión relacionados con la tecnología:

• Varela-Rodríguez, B. M.; Alvarez-Felgar, T.; Rodríguez Torres, A. M. y Freire-Picos M. A. «A microscopy based system to detect homologous recombination in yeasts». Congreso BAC2017, León, julio de 2017, p. 105. ISBN: 978-84-947468-0-2.
• Varela Rodríguez, B. «Expresión de formas recombinantes de GFP en levaduras: efecto de la cepa y componentes del poro nuclear». Tesis de licenciatura, Facultad de Ciencias, UDC noviembre de 2013.
• Varela Rodríguez, B. «Expresión en levaduras de genes GFP recombinantes en el mutante Δnup84 del Complejo del Poro nuclear». Trabajo de fin de máster, Facultad de Ciencias, UDC, junio de 2014.
• Varela-Rodríguez, B. M.; Rodríguez Torres, A. M.; Álvarez, T. y Freire-Picos, M. A. «3’-Untranslated regions are involved in Nup84-dependent recombinant events». Artículo en prensa, 2018.

Representación esquemática de las posibles localizaciones celulares.

Ejemplo. A Célula no sometida a cambios (C- control negativo) (C+ control positivo con fluorescencia nucleolar y citosólica). B Experimento en células mutadas.